QUELLE EST LA RECETTE EXACTE DU RÉACTIF POUR DÉMASQUER LES ANTIGÈNES ?

Les techniques de récupération d'antigènes existent depuis aussi longtemps que l'immunohistochimie. Dès que nous avons tenté d'attacher des anticorps à des antigènes dans les tissus, nous nous sommes vite rendu compte que ces protéines devaient être "accessibles" aux anticorps.

La plupart des tissus étant désormais fixés à l'aide de fixateurs à base d'aldéhyde qui stabilisent les tissus en réticulant les protéines, on a rapidement constaté que ces réticulations empêchaient la fixation en masquant les épitopes ciblés par les anticorps.

Nous ne savons pas exactement pourquoi le Dr Shan-Rong Shi, de l'université de Californie du Sud a eu l'idée d'utiliser un four à micro-ondes dans son laboratoire et d'y jeter ses lames, mais il a certainement révolutionné cette technique ! Ensuite, d'autres outils de cuisine étranges, comme les autocuiseurs ou les cuiseurs à vapeur pour le riz, ont été introduits dans les laboratoires pour permettre la pratique de cette technique, qui consiste essentiellement à chauffer un tampon.

Les solutions les plus utilisées pour cette méthode sont le citrate de sodium (10 mM, pH 6), l'EDTA (1 mM, pH 8) et le Tris/EDTA (pH 9), à des températures légèrement inférieures à 100 °C, l'ébullition ayant tendance à endommager les tissus. Les solutions acides comme les tampons au citrate tendent à mieux préserver la morphologie, tandis que les solutions alcalines comme l'EDTA améliorent le signal mais risquent de décoller la section de la lame.

Cependant, il n'existe pas de protocole ou de réactif universellement utilisé, car des protéines différentes peuvent nécessiter des approches différentes. Il existe également des solutions acides qui permettent de récupérer les sites antigèniques à température ambiante. L'une d'elles est le HCL 2N, l'autre l'acide formique à une concentration de 10 %. Cette dernière méthode est recommandée pour cibler les plaques amyloïdes dans le diagnostic de la maladie d'Alzheimer et d'autres maladies neurodégénératives.

Des solutions commerciales de "démasquage" sont proposées, mais on peut toujours jouer avec ses propres formulations locales de tampons. En effet le mécanisme de démasquage des antigènes, comme beaucoup d'autres techniques d'histologie, n’est pas parfaitement compris et n’est pas soumis à un ensemble spécifique de règles strictes. Il faut toujours compter sur l'expertise du technologiste,  un peu comme quelqu'un qui fait un gâteau. C'est peut-être la raison pour laquelle tant d'ustensiles de cuisine se retrouvent entre les mains de techniciens de laboratoire, qui doivent tous être de grands cuisiniers !