LES RÉACTIFS ACCESSOIRES POURTANT ESSENTIELS !

Dans une coloration histologique, on se préoccupe évidemment de la qualité de l’hématoxyline et du contre colorant que ce soit de l’éosine ou le composé phloxine/safran.

Mais la coloration ne sera pas réussie si on n’utilise pas des réactifs accessoires de qualité! Lorsqu’on emploie une hématoxyline régressive, on doit la différencier correctement. Une solution aqueuse faiblement acide, d’acide acétique ou chlorhydrique est habituellement utilisée. L’utilisation d’une solution alcoolique acidifiée, qui procure une différentiation plus douce et progressive donc plus contrôlable est aussi fréquemment employée. De telles solutions sont ainsi offertes a différentes concentrations chez les fournisseurs de réactifs Comme l’étape de de différentiation est critique pour obtenir une belle coloration nucléaire et qu’elle a été soigneusement vérifiée initialement, on ne veut pas qu’une vulgaire erreur dans la dilution puisse la mettre en péril!. 

Ainsi il existe des solutions de différentiation du commerce prêtes à l’emploi ou concentrées qui vous procureront l’assurance d’une reproductibilité dans vos teintes de noyaux sans ruiner votre budget.

L’étape suivant de la coloration consiste à exposer les tissus colorés à un réactif légèrement alcalin ce qui permettra de « bleuir » les sections, de les faire passer du rouge au bleu. On a longtemps utilisé l’eau du robinet naturellement alcaline pour cette étape mais la variation du pH de l’eau courante au fur et à mesure des changements de saisons, par exemple lors de la fonte des neiges au printemps, ainsi que l’arrivée de plusieurs réactifs de bleuissement commerciaux ont rendu cette manière de faire plutôt obsolète. Des solutions d’eau de Scott ou des formules de tampons répondent parfaitement à ce besoin tout en procurant une reproductibilité difficile à obtenir en fabriquant ses propres réactifs maison.

En conclusion, si vous ou vos pathologistes n’êtes pas satisfaits de vos colorations, pensez à jeter un œil aux réactifs accessoires!

1. Quels sont les principaux colorants utilisés dans les colorations histologiques classiques ?

Les colorants principaux sont :

L’hématoxyline pour les noyaux
L’éosine ou le mélange phloxine/safran comme contre-colorants pour le cytoplasme et les tissus.

2. Pourquoi la qualité des réactifs accessoires est-elle importante dans une coloration histologique ?

Parce qu’une bonne coloration ne dépend pas seulement des colorants, mais aussi des réactifs utilisés pour les étapes de différenciation et de bleuissement. Sans eux, le résultat peut être mauvais même si les colorants sont excellents.

3. À quoi sert la différenciation dans une coloration à l’hématoxyline régressive ?

La différenciation permet de retirer l’excès d’hématoxyline afin d’obtenir une coloration nucléaire nette et précise.

4. Quels types de solutions sont utilisées pour la différenciation ?

Solutions aqueuses faiblement acides (acide acétique ou chlorhydrique)
Solutions alcooliques acidifiées, qui permettent une différenciation plus douce, progressive et contrôlable.

5. Pourquoi est-il préférable d’utiliser des solutions de différenciation commerciales prêtes à l’emploi ?

Parce qu’elles garantissent :

Une reproductibilité des résultats
Une moindre chance d’erreur de dilution
Un contrôle stable de l’intensité des teintes

6. Quelle est l’étape qui suit la différenciation ?

Le bleuissement, qui consiste à exposer la section à un réactif légèrement alcalin pour faire passer l’hématoxyline du rouge au bleu.

7. Pourquoi l’eau du robinet n’est-elle plus recommandée pour le bleuissement ?

Parce que son pH varie selon les saisons et les régions, ce qui rend la coloration non reproductible.

8. Quels produits sont maintenant utilisés pour le bleuissement ?

L’eau de Scott
Des tampons commerciaux prêts à l’emploi
Ces solutions assurent une stabilité et une reproductibilité des résultats.

9. Que faire si les colorations dans un laboratoire sont insatisfaisantes ?

Il est recommandé de vérifier la qualité et la préparation des réactifs accessoires (solutions de différentiation et de bleuissement), car ils influencent fortement le résultat final.