Trop, c'est comme pas assez

Lors de la circulation des tissus en histologie, la fixation est suivie d'une deuxième étape : la déshydratation. Il faut éliminer l'eau du tissu pour le rendre miscible avec la paraffine, afin de réaliser des blocs pouvant être coupés au microtome puis colorés.

Le réactif de déshydratation le plus utilisé est l'éthanol, pur ou dénaturé. Les deux agissent de manière similaire et vous pouvez vous reporter à un autre article de la base de connaissances sur ce sujet : https://chaptec.com/ca/articles/20250221105654/the-question-that-shocks.html

L'éthanol est excellent, mais il arrive parfois qu'il élimine trop d'eau du tissu. Comment cela est-il possible ?

L'eau présente dans les tissus est soit libre, soit liée. L'élimination de l'eau libre est l'objectif recherché lors du traitement des tissus. Cependant, l'élimination de l'eau liée rend le tissu très dur et cassant, ce qui le rend difficile à couper car il a perdu une partie de sa structure.

Cela est particulièrement vrai pour les petites biopsies. En raison de leur petite taille, elles subissent proportionnellement une déshydratation plus importante qu'un tissu plus grand pour une durée d'exposition identique.

Il en résulte parfois des biopsies difficiles à sectionner et des tissus qui se transforment parfois en poussière lorsqu'on tente de les couper au microtome. Les techniciens expérimentés vous diront qu'ils ont rencontré des difficultés semblables pour faire des coupes de biopsies et qu'ils ne savent pas toujours exactement pourquoi.

De nouveaux réactifs de déshydratation à base de méthanol et d’isopropanol sont désormais disponibles. Les propriétés solvantes de l’IPA contribuent également à améliorer la « clarification »

La clarification est la deuxième étape du traitement des tissus. Une fois la déshydratation terminée, le tissu est immergé dans un solvant qui dissout les lipides contenus dans les tissus. Ces espaces vides seront ensuite comblés par de la paraffine. Cela rend également le tissu transparent en rapprochant son indice de réfraction de celui du verre. Cette étape est généralement réalisée avec un solvant tel que le xylène ou le toluène.

L'extraction des lipides est un défi pour les tissus très gras comme ceux du sein ou du cerveau. L'utilisation de ce nouveau réactif permettra de lancer le processus d'extraction des lipides simultanément à la déshydratation, garantissant ainsi un tissu mieux clarifié après l'étape au xylène.

Une extraction incomplète des lipides peut également rendre la coupe extrêmement difficile en raison des lipides résiduels (essayez de faire une fine tranche de beurre !) Si vous rencontrez ce problème lors de la coupe, vous pourriez envisager de changer de réactif de déshydratation.

L'éthanol est également utilisé dans le processus de coloration, comme étape de décoloration après l'éosine dans la coloration H&E. Le nouveau réactif de déshydratation s'est révélé efficace en tant que substitut de l'éthanol pour cette application, rendant les lames brillantes et offrant un meilleur contraste.

Chaptec a lancé Hydrofix, notre nouveau réactif de déshydratation. Fabriqué au Canada, peu dispendieux et expédié rapidement. Si vous rencontrez l'un des problèmes décrits ci-dessus, Hydrofix pourrait être une solution et des échantillons sont offerts pour évaluation. Proposé dans toutes les concentrations habituelles : 50, 70, 80, 90, 95 et 100 %.

Quels sont les deux types d’eau présents dans les tissus ?

L’eau libre et l’eau liée.

Qu’est-ce que l’eau libre ?

C’est une eau mobile qui remplit les espaces intra- et extracellulaires et agit comme solvant.

Qu’est-ce que l’eau liée ?

C’est une eau attachée aux macromolécules (comme les protéines), jouant un rôle structural.

Quelle est la différence entre l’eau libre et l’eau liée lors de la déshydratation ?

L’eau libre est facilement éliminée, tandis que l’eau liée résiste et est importante pour la structure du tissu.

Pourquoi les petites biopsies sont-elles plus sensibles à la déshydratation ?

Parce qu’elles subissent proportionnellement plus de déshydratation pour un même temps d’exposition.

Quel problème peut survenir lors de la coupe des biopsies ?

Elles peuvent devenir difficiles à sectionner ou se désagréger en poussière.

Quelle est l’étape qui suit la déshydratation ?

La clarification  (éclaircissement).

Quel est le rôle de la clarification?

Dissoudre les lipides et rendre le tissu transparent pour faciliter l’infiltration de la paraffine.

Quels solvants sont utilisés pour la clarification?

Le xylène ou le toluène.

Pourquoi l’extraction des lipides peut-elle être difficile ?

Parce que certains tissus, comme le sein ou le cerveau, sont très riches en graisses.

Que se passe-t-il si les lipides ne sont pas complètement éliminés ?

Cela rend la coupe difficile, car les lipides restants gênent la coupe (comme couper du beurre).

Quels nouveaux réactifs de déshydratation sont proposés ?

Des mélanges de méthanol et d’isopropanol.

Quel avantage apporte l’isopropanol (IPA) ?

Il améliore le processus de clarification et aide à l’extraction des lipides.

L’éthanol est-il utilisé ailleurs que pour la déshydratation ?

Oui, dans la coloration H&E comme étape de décoloration après l’éosine.

Les nouveaux réactifs peuvent-ils remplacer l’éthanol ?

Oui, ils peuvent servir de substitut efficace et améliorer le contraste des lames.

Quel produit a été lancé par Chaptec ?

Hydrofix, un nouveau réactif de déshydratation.

Quels sont les avantages de Hydrofix ?

Il est économique, fabriqué au Canada, livré rapidement et disponible en plusieurs concentrations.