La fixation des tissus à la formaline et les colorations immunohistochimiques sont-elles incompatibles ?

En effet, si un tissu doit être bien fixé pour que les méthodes de coloration fonctionnent bien, c’est un peu différent avec les immunos. Les colorations immunohistochimiques utilisent des anticorps qui ciblent des épitopes, des parties spécifiques des protéines qui est reconnue par ceux-ci et qui s’y lient. La formaline fixe les tissus, et les protéines, en produisant de la réticulation ce qui a pour effet de masquer les épitopes!

Oui il existe des méthodes de démasquage (HIER, heat induced epitope retrieval).  mais ça ne fonctionne pas tout le temps. Des fois oui, des fois moins bien parfois pas du tout. Et les températures élevées de ces méthodes vont même parfois détruire les protéines qu’on cherche à identifier.

Depuis longtemps on sait que les sels de zinc mélangés à de la formaline compétitionnent avec celle-ci et forment de larges complexes insolubles qui empêchent la réticulation excessive, particulièrement celle qui bloque les sites antigéniques. 

Reste que si les sels de zinc agissent trop rapidement, la fixation essentielle du tissu à la formaline n’aura pas eu lieu et cela peut causer la dénaturation et la perte des épitopes nécessaires pour que la coloration immunologique fonctionne. Comment résoudre ce problème?

Il existe maintenant un fixateur de formaline tamponné rapide additionné de sels de zinc. Ce produit (TissuFix-Z) offre le meilleur des deux mondes en permettant une stabilisation rapide des protéines ainsi qu’une réticulation contrôlée par la concurrence des sels de zinc. Ainsi la coloration immunohistochimique fonctionne sans avoir à recourir aux méthodes de démasquage Le zinc agit également comme mordant ce qui améliore la qualité de la coloration de routine H&E.

La fixation des tissus à la formaline et les colorations immunohistochimiques sont-elles incompatibles ?

Pas totalement, mais elles peuvent poser problème ensemble. Une bonne fixation est essentielle pour les colorations classiques, tandis que les colorations immunohistochimiques ont des exigences particulières liées aux épitopes.

Pourquoi la formaline pose-t-elle problème en immunohistochimie ?
 

Les colorations immunohistochimiques utilisent des anticorps qui reconnaissent des épitopes, c’est-à-dire des régions spécifiques des protéines. La formaline fixe les tissus en provoquant une réticulation des protéines, ce qui peut masquer ces épitopes et empêcher la liaison des anticorps.

Existe-t-il des solutions pour restaurer les épitopes masqués ?
 

Oui, des méthodes de démasquage comme le HIER (Heat Induced Epitope Retrieval) existent. Elles utilisent des températures élevées pour révéler les épitopes.

Ces méthodes de démasquage sont-elles toujours efficaces ?
 

Non. Leur efficacité est variable : parfois elles fonctionnent bien, parfois partiellement, et parfois pas du tout. De plus, les températures élevées peuvent détruire les protéines que l’on cherche à identifier.

Quel est le rôle des sels de zinc dans la fixation des tissus ?
 

Les sels de zinc, lorsqu’ils sont mélangés à la formaline, entrent en compétition avec celle-ci et forment de grands complexes insolubles. Cela limite la réticulation excessive des protéines, en particulier celle qui bloque les sites antigéniques.

Les sels de zinc présentent-ils des inconvénients ?
 

Oui. S’ils agissent trop rapidement, la fixation adéquate par la formaline peut être insuffisante, entraînant une dénaturation des protéines et une perte des épitopes nécessaires à l’immunohistochimie.

Comment résoudre ce dilemme entre fixation optimale et préservation des épitopes ?
 

La solution est l’utilisation d’un fixateur de formaline tamponné rapide additionné de sels de zinc.

Quel est l’avantage de ce type de fixateur (ex. TissuFix-Z) ?
 

Il combine une stabilisation rapide des protéines et une réticulation contrôlée grâce à la concurrence des sels de zinc. Cela permet une bonne immunocoloration sans recourir aux méthodes de démasquage.

Le zinc apporte-t-il d’autres bénéfices ?
 

Oui. Le zinc agit aussi comme mordant, ce qui améliore la qualité des colorations de routine, notamment la coloration H&E.