Clair comme du jus de pipe comme disait mon père.

On va parler ce matin de clarification, ou d’éclaircissement, un processus qui fait partie de la circulation des tissus en histologie et qu’on accomplit typiquement avec un solvant.

Dans le processus de circulation, on doit prendre un tissu, qui contient de l’eau et des lipides et le rendre compatible avec la paraffine utilisée pour l’enrobage, qui elle n’est pas miscible avec ces composantes. On commence par déshydrater le tissu avec de l’alcool qui en retire l’eau. On poursuit le processus en utilisant un solvant qui désalcoolise le tissu, solvant qui est lui compatible avec la paraffine. Ce solvant va dissoudre les graisses et les lipides pour que la paraffine puisse les remplacer et procurer une structure semblable à celle du tissu frais. Mais le solvant doit faire quelque chose d’autre aussi; il doit modifier l’indice de réfraction du tissu de manière à le rendre transparent car le pathologiste lui va l’examiner au microscope.

Le tissu est composé de plusieurs structures qui ont toutes des indices de réfraction différents, c’est-à-dire qu’elles « courbent » la lumière différemment lorsqu’elle passe au travers. De la même manière qu’une lame de microscope de verre est transparente, on la voit quand même car son indice de réfraction est différent de celui de l’air qui l’entoure, lui aussi transparent. Le clarifiant va devoir donc modifier l’indice de réfraction de ces structures de manière à le rendre semblables et proches de celui des protéines qui composent le tissu. Ainsi, celui-ci devient transparent. Si on ne faisait pas ça, certaines structures du tissu seraient opaques car la lumière passant au travers d’elles serait courbée différemment de celle des structures alentour.

La coloration qui suivra va ensuite modifier l’absorption de la lumière par les différentes structures qui composent le tissu, ce qui permettra de les visualiser et de les identifier au microscope.

J’espère que cette démonstration est claire!

1. Qu’est-ce que la clarification (ou éclaircissement) en histologie ?

La clarification est une étape du processus de circulation des tissus qui consiste à rendre le tissu compatible avec la paraffine et transparent en utilisant un solvant.

2. Pourquoi doit-on clarifier un tissu ?

Parce que le tissu contient de l’eau et des lipides, alors que la paraffine utilisée pour l’enrobage n’est pas miscibleavec ces éléments.
Il faut donc modifier progressivement la composition interne du tissu pour permettre son infiltration par la paraffine.

3. Quelles sont les étapes précédant la clarification ?

Déshydratation : l’alcool retire l’eau contenue dans le tissu.
Déshydratation finale : le solvant remplace l’alcool et prépare le tissu à recevoir la paraffine.

4. Quel est le rôle du solvant utilisé pour la clarification ?

Le solvant doit :

Dissoudre les graisses et lipides
Remplacer l’alcool
Être compatible avec la paraffine
Et surtout : modifier l’indice de réfraction du tissu pour le rendre transparent

5. Pourquoi le tissu doit-il devenir transparent ?

Parce que le tissu est composé de structures ayant des indices de réfraction différents.
Sans clarification, certaines zones paraîtraient opaques sous le microscope.
En égalisant ces indices, la lumière se propage uniformément, rendant le tissu clair et lisible pour le pathologiste.

6. Que se passe-t-il après la clarification ?

On procède à la coloration, qui modifie l’absorption de la lumière par les différentes structures du tissu.
C’est cette étape qui permet d’identifier et de différencier les cellules au microscope.

7. En résumé, à quoi sert la clarification ?

Elle sert à :

Préparer le tissu à l’infiltration par la paraffine
Dissoudre les lipides
Uniformiser l’indice de réfraction
→ afin que le tissu devienne transparent et prêt à être coloré et observé en microscopie.